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第一篇 基本技能训练3

第一章 实验室规则3

一、学生实验守则3

二、实验室安全防护知识3

三、实验室灭火法4

第二章 玻璃仪器的洗涤6

一、生物化学与分子生物学实验常用玻璃仪器6

二、实验室常用的洗涤方法6

三、常用玻璃仪器的洗涤7

四、玻璃器皿的干燥9

第三章 常用容量器的正确使用10

一、吸管10

二、微量移液器10

三、容量瓶11

四、滴定管12

五、量筒14

第四章 试剂的配制15

一、溶液浓度的表示及配制15

二、溶液浓度的调整15

三、试剂配制中的注意事项16

第五章 制备生命大分子物质的基本操作17

一、实验材料的选择和处理17

二、细胞的破碎18

三、有效成分的提取18

四、振荡与搅拌19

五、离心19

六、沉淀的过滤与洗涤19

七、生命大分子物质的浓缩20

八、生命大分子物质的冷冻干燥21

第六章 实验误差和数据处理22

一、实验误差22

二、数据处理23

第七章 实验记录、实验报告及考评方式25

一、实验记录25

二、实验报告25

三、考核方式与评分方法26

第二篇 生物化学实验31

第八章 生物化学基础实验31

实验一 硅胶G薄层层析法分离鉴定糖类31

实验二 植物水溶性总糖的提取和含量测定（蒽酮比色法）34

实验三 脂肪碘值的测定37

实验四 磷硫铁法测定血清总胆固醇含量40

实验五 甲醛滴定法测定氨基氮42

实验六 纸层析法分离鉴定氨基酸45

实验七 蛋白质两性性质与等电点的测定49

实验八 蛋白质的沉淀、变性反应51

实验九 蛋白质含量的测定（双缩脲法）56

实验十 蛋白质含量的测定（Folin-酚法）59

实验十一 蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝法）61

实验十二 酶的特异性64

实验十三 酶促反应动力学66

实验十四 动物肝脏DNA的提取71

实验十五 二苯胺定糖法测定DNA含量74

实验十六 定磷法测定RNA含量76

实验十七2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C含量79

第九章 生物化学强化实验83

实验十八3，5-二硝基水杨酸比色定糖法83

实验十九 粗脂肪的提取及含量的测定86

实验二十 酪蛋白的制备及含量的测定88

实验二十一 蛋白质含量的测定（微量凯氏定氮法）92

实验二十二 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳96

实验二十三 蛋白质的分级盐析及凝胶过滤法脱盐101

实验二十四 琼脂糖凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同功酶104

实验二十五 薄层层析法鉴定转氨酶的转氨基作用107

实验二十六 荧光分光光度法测定维生素B2的含量110

第十章 生物化学综合实验114

实验二十七 卵磷脂的制备及气相色谱分析114

实验二十八 大豆蛋白的提取、含量测定及氨基酸组成分析119

实验二十九 鸡卵类粘蛋白的分离与纯化122

实验三十 细胞色素C的制备及测定125

实验三十一 SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量129

实验三十二 凝胶过滤层析法测定蛋白质相对分子质量135

实验三十三 亲和层析法纯化胰蛋白酶141

实验三十四 高效液相色谱法测定雌激素含量147

实验三十五 离子交换柱层析分离核苷酸152

实验三十六 旋光法测定淀粉含量157

第三篇 分子生物学实验163

第十一章 分子生物学基础实验163

实验一 碱变性法提取质粒DNA及纯化163

实验二 质粒DNA的限制内切酶酶切及琼脂糖凝胶电泳分析165

实验三 脉冲电泳技术169

实验四 λ噬菌体感染与效价测定171

实验五 提取纯化大肠杆菌基因组DNA173

实验六 哺乳动物mRNA的分离及纯化175

第十二章 分子生物学综合实验179

实验七 Western Blotting179

实验八 DNA重组和转化183

实验九 大肠细菌的基因芯片鉴定185

实验十 DNA的Southern杂交188

实验十一 生物系统学研究中的RAPD技术191

第四篇 创新设计项目197

第十三章 生物化学与分子生物学创新设计项目197

一、实验目的197

二、基本要求197

三、结果处理197

四、选题范围197

附录199

一、生物化学与分子生物学实验常用仪器的使用方法199

（一）分光光度计199

（二）离心机200

（三）电泳仪202

（四）PCR仪203

（五）凝胶成像系统204

（六）恒温水浴锅204

（七）酸度计205

（八）恒温振荡培养箱206

（九）旋转蒸发仪207

（十）高效液相色谱仪207

（十一）核酸蛋白检测系统208

（十二）超净工作台210

（十三）高压灭菌锅210

二、常用缓冲溶液的配制211

（一）甘氨酸—盐酸缓冲液（0.05mol／L，pH2.2～3.6，25℃）211

（二）氯化钾—盐酸缓冲液（0.05mol／L，pH1.0～2.2，25℃）212

（三）邻苯二甲酸氢钾—盐酸缓冲液（0.05mol／L，pH2.2～4.0，20℃）212

（四）醋酸—醋酸钠缓冲液（0.2mol／L，pH3.6～5.8，18℃）212

（五）邻苯二甲酸氢钾—氢氧化钠缓冲液（pH4.1～5.9，25℃）213

（六）柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液（0.1mol／L，pH3.0～6.2）213

（七）磷酸二氢钾—氢氧化钠缓冲液（0.05mol／L，pH5.8～8.0）214

（八）磷酸氢二钠—柠檬酸缓冲液（pH2.6～7.6）214

（九）磷酸氢二钠—磷酸二氢钠缓冲液（0.2mol／L，25℃）215

（十）巴比妥—盐酸缓冲液（pH6.8～9.6，18℃）215

（十一）Tris—盐酸缓冲液（0.05mol／L，pH7～9，25℃）216

（十二）硼酸—硼砂缓冲液（pH7.4～9.0）216

（十三）硼砂缓冲液（pH8.1～10.7，25℃）216

（十四）甘氨酸—氢氧化钠缓冲液（0.05mol／L，pH8.6～10.6，25℃）217

（十五）碳酸钠—碳酸氢钠缓冲液（0.1mol／L，pH9.2～10.8）217

（十六）酸度计常用标准缓冲溶液的配制218

三、层析法常用数据表218

（一）凝胶过滤用相对分子质量标准品218

（二）琼脂糖凝胶技术数据219

（三）Sephadex G型交联葡聚糖凝胶的数据220

（四）Sephadex G型交联葡聚糖凝胶溶胀所需时间221

（五）聚丙烯酰胺凝胶技术数据221

（六）层析介质的选择221

（七）薄层层析分离各类物质常用的展层溶剂222

四、硫酸铵饱和度常用表223

（一）不同温度下饱和硫酸铵溶液的数据223

（二）调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）223

（三）调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃）224

五、细菌培养基、抗生素224

（一）LB培养基配制方法224

（二）NZCYM培养基配制方法225

（三）NZYM培养基配制方法225

（四）高浓度肉汤配制方法225

（五）SOB培养基配制方法225

（六）M9培养基225

（七）2×YT培养基225

（八）固体培养基225

（九）常用抗生素溶液226